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Créé le 21 janvier 2004
Principe de la coloration de Gram
La coloration de Gram mise au point en 1884, s'effectue en trois temps. . Dans un premier temps, les bactéries sont colorées en violet par un colorant basique tel que le violet de gentiane puis par une solution de lugol (mordançage). . Dans un deuxième temps, qualifié de temps de différenciation, les bactéries sont soumises à l'action de l'alcool ou d'un mélange alcool + acétone. Les bactéries se répartissent en deux catégories : celles qui conservent la coloration violette et qui sont qualifiées de bactéries à Gram positif et celles qui sont décolorées et qui sont appellées bactéries à Gram négatif. . Dans un troisième temps, afin de mieux visualiser les bactéries décolorées, on procède à un traitement par la fuchsine ou par la safranine. Les bactéries à Gram positif apparaissent alors violettes et les bactéries à Gram négatif se recolorent en rouge ou en orange. . Le mécanisme de cette coloration est connu. Le violet de gentiane se fixe sur des composants cytoplasmiques et après ce temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes. Chez les bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l'alcool (ou le mélange alcool + acétone) qui décolore le cytoplasme alors que, chez les bactéries à Gram positif, la paroi constitue une barrière imperméable à l'alcool et le cytoplasme demeure coloré en violet.
Remarques : . La présence d'une épaisse couche de polysaccharides autour de la paroi peut faire apparaître Gram positive une bactérie dont la structure pariétale est typique d'une bactérie à Gram négatif. C'est le cas notamment de certaines espèces du genre Azospirillum. . Certaines bactéries dont la structure pariétale est typique d'une bactérie à Gram positif peuvent apparaître Gram négatif. C'est le cas par exemple de certaines souches de Butyrivibrio sp. dont la paroi est très fine. . Certaines bactéries dont la structure pariétale est typique d'une bactérie à Gram positif peuvent apparaître "Gram variable". Dans ce cas, la coloration de Gram effectuée sur une culture pure, montre un mélange de cellules à Gram positif et de cellules à Gram négatif. Ce phénomène est fréquemment observé avec des souches de Bacillus sp., notamment si la coloration est effectuée sur des cultures de plus de 18 heures. . Les mycobactéries sont typiquement des bactéries à Gram positif mais elles ne prennent pas la coloration de Gram. . Les "Tenericutes", bactéries dépourvues de paroi, se colorent comme des bactéries à Gram négatif. Il en va de même pour les formes L.
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