J.P. Euzéby : Dictionnaire de Bactériologie Vétérinaire

Dernière mise à jour le 02 février 2000

Quelques milieux utilisés pour l'isolement des Listeria spp.

D'après :
. BEUMER (R.R.), te GIFFEL (M.C.) et COX (L.J.) : Optimization of haemolysis in enhanced haemolysis agar (EHA)-a selective medium for the isolation of Listeria monocytogenes. Lett. Appl. Microbiol., 1997, 24, 421-425.
. ATLAS (R.M.) et PARKS (L.C.) : Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Boca Raton, 1993, 1079 pages

Bouillon d'enrichissement de Fraser - Composition pour 1 litre :
NaCl : 20,0 g
Na₂HPO₄ : 12,0 g
Extraits de viande de bœuf : 5,0 g
Protéose peptone : 5,0 g
Digestion pancréatique de caséine : 5,0 g
Extraits de levure : 5,0 g
LiCl : 3,0 g
KH₂PO₄ : 1,35 g
Esculine : 1,0 g
Acriflavine (25 mg de chlorhydrate d'acriflavine dans 10 mL d'eau distillée) : 10 mL
Acide nalidixique (20 mg d'acide nalidixique dans 10 mL d'eau distillée) : 10 mL
Citrate de fer ammoniacal (500 mg de citrate de fer ammoniacal dans 10 mL d'eau distillée) : 10 mL
pH : 7,2 ± 0,2 à 25 °C

Bouillon d'enrichissement de Fraser "demi" - Composition pour 1 litre :
Composition identique au bouillon d'enrichissement de Fraser mais la solution d'acriflavine est composée de 12,5 mg de chlorhydrate d'acriflavine dans 10 mL d'eau distillée.

Bouillon d'enrichissement pour Listeria - Composition pour 1 litre :
Digestion pancréatique de caséine : 17,0 g
Extraits de levure : 6,0 g
NaCl : 5,0 g
Digestion papaïnique de farine de soja : 3,0 g
Glucose : 2,5 g
K₂HPO₄ : 2,5 g
Cycloheximide : 0,05 g
Acide nalidixique : 0,04 g
Acriflavine (chlorhydrate) : 0,015 g
pH 7,3 ± 0,2 à 25 °C

Bouillon d'enrichissement pour Listeria (FDA) - Composition pour 1 litre :
Digestion pancréatique de caséine : 17,0 g
Extraits de levure : 6,0 g
NaCl : 5,0 g
Digestion papaïnique de farine de soja : 3,0 g
K₂HPO₄ : 2,5 g
Glucose : 2,5 g
Eau distillée : qsp 1L
Solution d'acide nalidixique (0,5 g d'acide nalidixique dans 100 mL d'eau distillée) : 8,0 mL
Solution de cycloheximide (1,5 g de cycloheximide dissous dans 40,0 mL d'éthanol ; eau distillée qsp 100 mL) : 5,1 mL
Solution d'acriflavine (0,5 g d'acriflavine (chlorhydrate) dans 100 mL d'eau distillée) : 3,0 mL
pH : 7,3 ± 0,2 à 25 °C

Bouillon d'enrichissement UVM (University of Vermont) - Composition pour 1 litre :
NaCl : 20,0 g
Na₂HPO₄ : 9,6 g
Digestion pancréatique de caséine : 5,0 g
Digestion peptique de tissus animaux : 5,0 g
Extraits de viande de bœuf : 5,0 g
Extraits de levure : 5,0 g
KH₂PO₄ : 1,35 g
Esculine : 1,0 g
Acide nalidixique : 40,0 mg
Acriflavine (chlorhydrate) : 12,0 mg
pH 7,2 ± 0,2 à 25 °C

Bouillon d'enrichissement UVM (University of Vermont) modifié - Composition pour 1 litre :
Composition identique au bouillon d'enrichissement UVM (University of Vermont) mais, la quantité d'acide nalidixique est de 20,0 mg.

Bouillon d'enrichissement sélectif UVM I (University of Vermont) - Composition pour 1 litre :
NaCl : 20,0 g
Na₂HPO₄ : 12,0 g
Extraits de viande de bœuf : 5,0 g
Protéose peptone : 5,0 g
Digestion pancréatique de caséine : 5,0 g
Extraits de levure : 5,0 g
KH₂PO₄ : 1,35 g
Esculine : 1,0 g
Solution d'acide nalidixique (0,2 g d'accide nalidixique dans 10,0 mL de NaOH 0,1 M) : 1,0 mL
Solution d'acriflavine (0,12 g d'acriflavine dans 10 mL d'eau distillée) : 1,0 mL
pH : 7,4 ± 0,2 à 25 °C

Bouillon d'enrichissement sélectif UVM II (University of Vermont) - Composition pour 1 litre :
Composition identique au bouillon d'enrichissement UVM I mais la solution d'acriflavine est préparée avec 0,25 g d'acriflavine dans 10 mL d'eau distillée.

Gélose acridine - acide nalidixique :
Gélose nutritive : 20 mL
Acide nalidixique : 40 µg/mL
Acriflavine neutre : 10 µg/mL

Gélose Columbia ANC - Composition pour 1 litre :
Agar : 15,0 g
Pantone : 10,0 g
Bitone : 10,0 g
NaCl : 5,0 g
Hydrolysat trypsique de cœur de bœuf : 3,0 g
Amidon de maïs : 1,0 g
Acide nalidixique : 15 mg
Sulfate de colistine : 10 mg

Gélose EHA (Enhanced Haemolysis Agar) - Composition pour 1 litre :
Trypticase soy agar blood agar base EH (Difco) : 40 g
LiCl : 5 g
4-methyl-umbelliferyl-beta-D-glucoside (Sigma) : 50 mg
Supplément PALCAM (Merk) : 2 ampoules
Sphingomyélinase (Sigma) : 10 unités
Tampon PBS (Na₂HPO₄.2H₂O : 1,44 g/L ; NaCl : 8 g/L ; KCl : 0,2 g/L) : 50 mL
Sang de mouton défibriné : 50 mL
Les colonies de Listeria sp. apparaissent fluorescentes en lumière ultraviolette (366 nm) et les colonies de Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii et Listeria seeligeri sont hémolytiques.

Gélose de Despierre :
Gélose Columbia ou trypticase soja : 20 mL
Acide nalidixique : 40 µg/mL
Polymyxine : 3 µg/mL
Rhamnose : 1 p. 1000

Gélose LPM (Lithium chloride Phenylethanol Moxalactam) - Composition pour 1 litre :
Agar : 15,0 g
Glycine anhydre : 10,0 g
LiCl : 5,0 g
NaCl : 5,0 g
Digestion pancréatique de caséine : 5,0 g
Digestion peptique de tissus animaux : 5,0 g
Extraits de viande de bœuf : 3,0 g
Phényléthanol : 2,5 g
Solution de moxalactam (0,1 g de moxalactam dans 10 mL d'eau distillée) : 2,0 mL
pH : 7,3 ± 0,2 à 25 °C

Gélose LPM (Lithium chloride Phenylethanol Moxalactam) à l'esculine et au citrate de fer ammoniacal - Composition pour 1 litre :
Composition identique à la gélose LPM mais contient, de plus, 1,0 g d'esculine et 0,5 g de citrate de fer ammoniacal.

Gélose de McBride (McBride Listeria agar) - Composition pour 1 litre :
Agar : 15 g
Glycine : 10,0 g
Digestion pancréatique de caséine : 5,0 g
Digestion peptique de tissus animaux : 5,0 g
NaCl : 5,0 g
Extraits de viande de bœuf : 3,0 g
Phényléthanol : 2,5 g
LiCl : 0,5 g
pH : 7,3 ± 0,2 à 25 °C

Gélose de McBride modifiée - Composition pour 1 litre :
Agar : 15,0 g
Glycine anhydre : 10,0 g
Tryptose : 10,0 g
NaCl : 5,0 g
Extraits de viande de bœuf : 3,0 g
Phényléthanol : 2,5 g
LiCl : 0,5 g
Solution de cycloheximide (0,2 g de cycloheximide dans 10 ml d'eau distillée) : 10,0 mL
pH : 7,3 ± 0,2 à 25 °C

Gélose Oxford - Composition pour 1 litre :

Peptone : 23,0 g
LiCl : 15,0 g
Agar : 10,0 g
Amidon de maïs : 1,0 g
Esculine : 1,0 g
Citrate de fer ammoniacal : 0,5 g
Solution d'antibiotiques : 10,0 mL
Sur gélose Oxford, les colonies de Listeria apparaissent noires et entourées d'un halo noir.

Solution d'antibiotiques pour la gélose Oxford :
Cycloheximide : 0,4 g
Sulfate de colistine : 0,02 g
Fosfomycine : 0,01 g
Acriflavine : 5,0 mg
Céfotétan : 2,0 mg
Ethanol (solution à 50 p. cent) : 10,0 mL
pH : 7,0 ± 0,2 à 25 °C

Gélose Oxford modifiée - Composition pour 1 litre :
Composition identique à la gélose Oxford mais la quantité d'agar est de 12 g et la solution d'antibiotiques est constituée de 0,015 g de moxalactam et de 0,010 g de sulfate de colistine placés dans 10 mL d'eau distillée.

Gélose PALCAM (Polymyxin Acriflavine LiCl Ceftazidime Esculine Mannitol) - Composition pour 1 litre :
Peptone : 23,0 g
LiCl : 15,0 g
Agar : 10,0 g
Mannitol : 10,0 g
NaCl : 5,0 g
Extraits de levure : 3,0 g
Amidon : 1,0 g
Esculine : 0,8 g
Citrate de fer ammoniacal : 0,5 g
Glucose : 0,5 g
Rouge de phénol : 0,08 g
Supplément PALCAM : 10,0 mL
pH : 7,2 ± 0,2 à 25 °C
Sur gélose PALCAM, les colonies de Listeria sont de couleur vert marron foncé, leurs centres apparaissent enfoncés dans la gélose et elles sont entourées d'un halo noir (hydrolyse de l'esculine).

Supplément PALCAM :
Ceftazidime : 20,0 mg
Polymyxine B : 10,0 mg
Acriflavine (chlorhydrate) : 5,0 mg
Eau distillée : 10,0mL

Gélose PALCAM (Polymyxin Acriflavine LiCl Ceftazidime Esculine Mannitol) à l'œuf - Composition pour 1 litre :

Composition identique à la gélose PALCAM mais contenant de plus 25,0 mL d'une émulsion de jaune d'œufs (11 jaunes d'œufs mélangés à un ouf entier).

Gélose PALCAM (Polymyxin Acriflavine LiCl Ceftazidime Esculine Mannitol) modifiée - Composition pour 1 litre :

Composition identique à la gélose PALCAM mais le supplément PALCAM est remplacé par le supplément PALCAM modifié :
Cycloheximide : 200,0 mg
Ceftazidime : 20,0 mg
Polymyxine B : 10,0 mg
Acriflavine (chlorhydrate) : 5,0 mg
Eau distillée : 10,0mL
Sur gélose PALCAM modifiée, les colonies de Listeria sont de couleur vert marron foncé, leurs centres apparaissent enfoncés dans la gélose et elles sont entourées d'un halo noir (hydrolyse de l'esculine).

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